产品名	Tth DNA ligase
别名
英文名	Tth DNA ligase
CAS号
分子式
分子量
EINECS编号
MDL号

产品说明

DNA 连接酶催化双链DNA 中5’-磷基和 3’-羟基之间形成磷酸二酯键的DNA 连接酶，以NAD+ 为辅酶，作为反应的能量来源。
只有当寡核苷酸与互补的靶DNA 完美配对，并且它们之间没有间隙时，才会发生连接。对单链DNA 或RNA 和平末端DNA 不具有
活性。因此，可以检测单碱基突变。高热稳定性允许用高密度杂交条件进行连接，在高特异性和严格性下进行SNPs 的精准检测。

本公司Tth DNA Ligase是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

在20 μl 反应体系中，45℃条件下，15 分钟内能使50% 的1 μg 经BstEII 消化的λ DNA 片段（12 bp 粘性末端，相当于0.0338pmole）
发生连接所需要的酶量定义为1 个活性单位。

活性测定条件

20 mM Tris-HCl(pH 7.6) , 25 mM Potassium Acetate , 10 mM Magnesium Acetate , 1 mM NAD+, 10 mM DTT , 0.1% TritonX-10，45℃反应。

浓度：40U/μl

保存条件：-20℃。

特点：耐热性好；可在高温条件下连接DNA链上的切刻位点。

应用范围：

连接酶链式反应（ligase chain reaction, LCR）反应中连接磷酸化寡核苷酸

连接酶链式反应检测等位基因特异性

产品包装规格及组成

Tth DNA Ligase	2000U	10000U
5×NAD型DNA Ligase Buffer	1 ml	1.5ml

质量控制

经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

酶贮存缓冲液：20 mM Tris-HCl (pH8.0), 150 mM NaCl, 1 mM DTT, 50%(v/v) glycerol.

应用实例：1. DNA连接反应

1）按下表配制反应体系

反应组分	ul
5× Buffer	4
底物：互补粘性末端>8nt的DNA	100ng-1µg
Tth DNA ligase(40U/µl)	1
H2O	Variable
总体积	20

2) 45°C连接15min

3）对于较长的双链DNA底物，琼脂糖电泳检测连接产物；对于短于100bp的短片段DNA，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测连接产物。
 

注意事项

* Taq DNA Ligase 不能代替 T4 DNA Ligase，本公司有售T4 DNA连接酶（AE1301）

* 长时间储存（>30 天），请存放在-80°C。